1．灭菌温度应是一个温度范围，而不是一个固定值
通常，培养基使用说明上灭菌温度是一个固定值，如：℃，20min，其实℃只是灭菌温度的下限，实际的灭菌温度在℃～℃（或℃）之间波动。如果是自动控温型灭菌锅，设定好灭菌温度下限为℃后，当温度升到℃（或℃）时，自动断电停止加热，当温度降到℃时，自动开始加热；如果是手动控温型灭菌锅，当温度升到℃时，手动切断电源停止加热，当温度降到℃时，手动接通电源开始加热。
2．不同类型高压蒸汽灭菌锅对排放冷空气的不同要求
非自动控温型灭菌锅（手提式灭菌锅）
对于这类灭菌锅必须排尽冷空气，如果不排尽冷空气，冷空气热膨胀后对压力锅的工作压力有影响，造成压力和温度不能一一对应，显示的温度比锅内的实际工作温度高，灭菌锅的工作温度不能达到设定的杀菌温度，会影响灭菌效果。
自动控温型灭菌锅
自动控温型灭菌锅通过热敏电极监测锅内温度变化，显示屏上显示的温度是锅内真实的工作温度，在冷空气没有排尽的情况下，也能够保证灭菌的温度要求。由于饱和水蒸汽的灭菌效果最好，所以在使用自动控温型灭菌锅时，也应该排放冷空气，提高灭菌效果。
3.不同类型高压蒸汽灭菌锅初次使用的安全检查
非自动控温型灭菌锅
①手动打开安全阀，看安全阀是否正常；
②加热升温过程中，看压力表指针的上升状况是否有受阻情况发生，没有受阻，可正常使用。
自动控温型灭菌锅
①手动打开安全阀，看安全阀是否正常；
②加水时，观察水位指示灯是否正常显示水位状况；
③在排除冷空气的前提下，观察显示屏上的温度和压力表指示温度的差，通常情况下，压力表上的温度略高于显示屏上的温度，此压力差如果不超过3℃，可正常使用。
4.影响灭菌效果的3个因素
水
水温应尽量低。温度不超过15℃。水的硬度值在0.7～2.0mmoL/L之间。
蒸汽的干燥程度
灭菌锅应使用干燥程度不小于0.9的饱和蒸汽，即蒸汽含水量不超过10%，金属负载状态下，干燥程度不小于0.95，以保持温度与压力符合线性关系。
灭菌时间
灭菌时间是指灭菌过程中灭菌室内达到规定温度后灭菌所需时间。
操作中，应注意观察蒸汽的进汽速度和压力,一般保持压力和温度同步上升。
5.液态物质灭菌要注意卸压不能过快
在对液态物质进行灭菌时，当灭菌结束注意卸压不能过快，尽量将排气阀关小，保持自然降压，保持系统原有的平衡，以防产生液体减少或喷溅现象。
提醒：高压灭菌锅属于高压设备，操作人员需在当地特种设备监督部门考核取证。压力阀也要定期送专业部门检验。平日按照设备作业指导书规定要求使用和维护保养并做好记录。
高压灭菌原理
在密闭的灭菌器内蒸气不外溢，压力不断上升，使水受热达到沸点，灭菌器内温度随之升高；在0.1MPa的压力下，锅内温度达℃。在此温度下，可以很快杀死各种细菌及高度耐热的芽孢。电磁阀控制的灭菌器（全自动型）逐次排放掉空气，剩余全是蒸气，灭菌进而彻底。
高压灭菌器（手动款）排气常规操作
关闭放气阀，通电待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀放出空气，待压力表指针归零后再关闭放气阀。再通电后，压力表上升达到0.1MPa时开始计时，维持压力0.1～0.15MPa，20min。到达保压时间后切断电源，在压力降到0.5MPa缓慢放出蒸气，注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。当压力降到零后开盖，取出培养基，摆在平台上以待冷凝。
对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不可随意延长时间。对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压容器装好，高压灭菌20～30min。
灭菌过程中容易遇到的问题
高压灭菌后的培养基，其pH值会下降0.2～0.3个单位。灭菌后培养基pH值的变化方向和幅度受多种因素影响。培养基中成分单一、含有高或较高浓度物质时，高压灭菌后的pH值变化幅度较大。高压灭菌常会使培养基中的蔗糖水分解为单糖，从而改变培养基的渗透压。在8%-20%蔗糖范围内，高压灭菌后的培养基约升高0.43倍。培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解，会使15%～25%的蔗糖水分解为葡萄糖和果糖。培养基值小于5.5，其水解量更多，培养基中添加0.1%活性炭时，高压下蔗糖水解大大增强，添加1%活性炭，蔗糖水解率可达5%。
防止高压灭菌产生的上述些变化可用的方法
设计培养基配方时尽量采用效果类似的稳定试剂并准确掌握剂量。
如：避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇，以IBA代替IAA，控制活性炭的用量(在0.1％以下)，注意pH值对高压灭菌下培养基中成分的影响等。
配制培养基时应注意成分的适当分组与加入的顺序。如将磷、钙和铁放在最后加入。
注意高压灭菌后培养基pH值的变化及恢复动态。
如：高压灭菌后的pH值常由5.80升高至6.48。而96h后又回降至5.8左右，在实验中可以根据这一规律加以应用。
灭菌器
灭菌器是一种能杀灭或清除传播媒介上一切微生物，包括细菌芽孢和非致病微生物的仪器。通常有湿热消毒灭菌、干热消毒灭菌、化学消毒灭菌三种方式。
常见类别
通常有湿热消毒灭菌设备、干热消毒灭菌设备、化学消毒灭菌设备三种类别。
灭菌器分类
辐射灭菌设备：医用伽玛射线灭菌器。
压力蒸汽灭菌设备：预真空蒸汽灭菌器、高压蒸汽灭菌器、自动高压蒸汽灭菌器、立式压力蒸汽灭菌器、卧式圆形压力蒸汽灭菌器、卧式矩形压力蒸汽灭菌器、脉动真空压力蒸汽灭菌器、手提式压力蒸汽灭菌器。
气体灭菌设备：环氧乙烷灭菌器、轻便型自动气体灭菌器。
干热灭菌设备：干热灭菌器、微波灭菌柜
高压电离灭菌设备：手术室用高压电离灭菌设备、病房用高压电离灭菌设备
工作原理
热力灭菌法
热力灭菌法是利用高温使菌体蛋白质凝固或变性，酶失去活性，代谢发生障碍，致细菌死亡。热力灭菌法包括湿热灭菌法和干热灭菌法。
湿热可使菌体蛋白凝固、变形；干热可使菌体蛋白氧化、变性、碳化和使电解质浓缩引起细胞的死亡。热力灭菌方便、效果好、无毒，是多数消毒供应中心使用的主要灭菌方法。
压力蒸汽灭菌方法是耐湿、耐热医疗器械的首选灭菌方法。
压力蒸汽灭菌采用湿热灭菌法，在同样温度下，湿热的杀菌效果比干热好，有以下原因：
蛋白质凝固所需的温度与其含水量有关，含水量越大，发生凝固所需的温度越低。湿热灭菌时的菌体蛋白质可吸收水分，因而比在同一温度的干热空气中更易于凝固。
湿热灭菌过程中蒸汽放出大量潜热，进一步提高温度。在同一温度下，湿热灭菌所需时间比干热短。
湿热气体的穿透力比干热气体强，故湿热比干热收效好。高压蒸汽可以杀死一切微生物，甚至包括细菌的芽孢，真菌的孢子等耐高温的个体。灭菌的蒸汽温度随蒸汽压力增加而升高，通过增加蒸汽压力，灭菌时间可被大大缩短。因此它是一种最有效，使用最广泛的灭菌方法。
低温灭菌法
低温灭菌方法是利用化学灭菌剂杀灭病原微生物的方法。化学药剂进行灭菌处理时所需温度较低，通常称为低温灭菌方法或化学灭菌方法。低温灭菌使用的化学消毒剂能够杀灭所有微生物，达到灭菌保证水平，这类具有灭菌作用的化学药剂有甲醛、戊二醛、环氧乙烷、过氧乙酸等。化学灭菌用于不能耐受高温、湿热材质类的器械的灭菌。
常用的低温灭菌方法有过氧化氢等离子低温灭菌、环氧乙烷灭菌、低温甲醛蒸汽灭菌等。
1.过氧化氢等离子低温灭菌
通过过氧化氢液体弥散变成气体状态后对物品进行灭菌，通过产生的等离子体进行第二阶段灭菌。等离子过程还可加快、彻底分解过氧化氢气体在器械和包装材料上的残留。等离子体灭菌法的特点为作用迅速、杀菌可靠、作用温度低、清洁而无毒性残留。适用于内镜、不耐热器材、各种金属器械、玻璃等物品；能吸收水分和气体。
2.环氧乙烷灭菌
环氧乙烷是一种无色气体，气味与乙醚相似，低浓度时无味。其气体穿透力强，可穿透玻璃纸、聚乙烯或聚氯乙烯薄膜等，对微生物的蛋白质、DNA、RNA产生非特异性的烷基化作用，使其失去新陈代谢的基本反应基而被杀灭，杀菌力强，杀面广，灭菌效果可靠，对灭菌物品损害较小等。
基本结构
压力蒸汽灭菌器
在一定压力下产生的蒸汽湿度高、穿透力强，能够迅速有效地杀灭微生物，是器械灭菌的主要方法之一。其特点是杀菌可靠、经济、快速、灭菌效果好。
压力容器：包括灭菌室、夹套、门和其他与灭菌室永久相连接的部件。采用不锈钢材料，并有保温材料层。
灭菌室：放置待灭菌物品的空间
夹套：环绕焊接在灭菌室外表面的不锈钢结构，实现机械加固，灭菌室温度控制的作用。
管路系统
蒸汽进入管路：与蒸汽汽源直接相连，将蒸汽送到灭菌室或夹套。
蒸汽疏水管路：将蒸汽冷凝水排出。
灭菌室排放管路：连接灭菌室与排放管路，是灭菌室内气体及冷凝水排出外部的通道。
给水管路：为灭菌器提供工作水源。
回气管路：将灭菌室和大气相连，当内室干燥时形成真空，通过回气管路，使内室与外界大气压平衡。
自动门与灭菌室密封组件
使用压缩空气或蒸汽使自动门与灭菌室密封。
干热灭菌器
干热灭菌器是由双层铁板制成的方形金属箱，外壁内层装有隔热的石棉板。箱底下放置大型火炉，或在箱壁中装置电热线圈。内壁上有数个孔，供流通空气用。箱前有铁门及玻璃门，箱内有金属箱板架数层。电热烤箱的前下方装有温度调节器，可以保持所需的温度。
灭菌效果检测
灭菌效果监测是评价其灭菌设备运转是否正常、灭菌药剂是否有效、灭菌方法是否合理、灭菌效果是否达标的主要手段。主要的灭菌效果监测方法包括：物理监测法、化学监测法、生物监测法及化学消毒剂的监测等。
使用方法
压力蒸汽灭菌器
加水至外筒内，被灭菌物品放入内筒。盖上灭菌器盖，拧紧螺旋使之密闭。灭菌器下用煤气或电炉等加热，同时打开排气阀门，排净其中冷空气，否则压力表上所示压力并非全部是蒸汽压力，灭菌将不完全。
待冷空气全部排出后(即水蒸气从排气阀中连续排出时)，关闭排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所需压力时(一般是.53kPa，即15磅/英寸2，温度为.3℃)，调整炉火，保持压力和温度(注意压力不要过大，以免发生意外)，维持15~30min。灭菌时间到达后，停止加热，待压力降至零时，慢慢打开排气阀，排除余气，开盖取物。切不可在压力尚未降低为零时突然打开排气阀门，以免灭菌器中液体喷出。
干热灭菌器
将培养皿、吸管、试管等玻璃器材包装后放入箱内，闭门加热。当温度上升至～℃时，保持温度2h，到达时间后，停止加热，待温度自然下降至40℃以下，方可开门取物，否则冷空气突然进入，易引起玻璃炸裂;且热空气外溢，往往会灼伤取物者的皮肤。一般吸管、试管、培养皿、凡士林、液体石蜡等均可用本法灭菌。
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